E. coli productora de la toxina Shiga (STEC) y Salmonella son los patógenos transmitidos por alimentos cárnicos bovinos más comunes, por ello es necesario el uso de métodos confiables y rápidos para determinar su prevalencia en la carne y así garantizar la seguridad alimentaria. Estos microorganismos pueden contaminar la carne bovina debido que se encuentran en el sistema gastro intestinal, y se pueden transferir en los canales del proceso de beneficio por incorrecta manipulación y malas prácticas de manufactura. A nivel mundial una gran cantidad de entidades han estipulado análisis y detección para prevenir afecciones al consumidor e impacto a Salud Pública.
En ese sentido, Las afecciones que pueden llegar a dar por el consumo de alimentos contaminados por estos microorganismos, se encuentra la salmonelosis, donde pacientes inmunocomprometidos puede causar la muerte. E. coli productoras de toxina Shiga, están asociadas con el desarrollo del Síndrome Urémico Hemolítico (SUH).
Actualmente se han descrito varios métodos para la detección y pre-enriquecimiento de Salmonella como caldo de enriquecimiento universal, caldo de lactosa, caldo de tripticasa de soja, caldo de nutrientes, entre otros, con o sin agentes selectivos. Para el caso de E.coli: O157:H7 y STEC no O157 el servicio de Inspección y Seguridad Alimentaria del USDA (FSIS) determino el siguiente método, enriquecimiento en TSB modificado y mTSB sin novobiocina. El screening para eliminar las muestras negativas se pueden realizar mediante ensayos por PCR seguido de la separación inmunomagnética (IMS) para concentrar y separar los patógenos diana, sembrarlos en agares selectivos, también diferenciales y así confirmar las colonias presuntamente positivas.
En relación con lo anterior, autores han mencionado que la utilización de estos protocolos es muy dispendiosa debido que se tienen que utilizar una gran variedad de reactivos, medios, entre otros ya que se deben analizar por separado Salmonella y E.coli haciendo que el costo de la prueba aumente. Algunas publicaciones científicas han realizado estudios para la optimización de estos procesos; el doctor Jamie Wasilenko junto a un equipo de investigadores diseñaron una encuesta con carne de res molida utilizando los ensayos de PCR del sistema BAX para el screening y determinar la presencia de E.coli O157:H7, las seis principales STEC no O157 (O26, O45, O103, O111, O121 y O145) y Salmonella.
Gracias a la versatilidad del Sistema Bax, este fue implementado. Su tecnología óptica de reconocimiento de sondas disminuye las respuestas indeterminadas y aumenta la robustez del método. Para así realizar análisis de los serotipos de E.coli y Salmonella y a su vez, determinar la presencia de los genes característicos de las STEC que son el gen stx y eae. De acuerdo a estos factores, junto con la necesidad de tener un respaldo de validaciones internacionales, se tuvo en cuenta este equipo de PCR.
La carne molida de estudio se obtuvo en tiendas minoristas de Pensilvania y Georgia durante el periodo de junio a octubre de 2012 donde se tomaron 325 g, y se incubo en 1,5L de caldo de soja tríptico a 42°C durante 18 horas. Los kits que se utilizaron para el Sistema Bax para la detección de estos microorganismos fueron: Panel 1 E.coli (O26, O111, O121), Panel 2 E.coli (O45, O103, O145), ensayo de PCR en tiempo real del Sistema Bax para E.coli O157: H7 y Salmonella. Los positivos por el Sistema Bax se confirmaron por medio de IMS (separación inmunomagnética). Los enriquecimientos se filtraron usando un colador de células estéril de 40 μm y luego se añadió 1 ml del enriquecimiento filtrado a perlas de captura inmunomagnética especificas RapidChek O-SDIX. Los enriquecimientos y las perlas inmunomagnéticas se mezclaron mediante rotación a temperatura ambiente durante 15 min, luego se realizó IMS en una plataforma Dynal MPC-S. Después de realizar los lavados de las perlas se resuspendieron en 1 ml de E-buffer. Se extendió una alícuota de cada suspensión de perlas en placas modificadas en Agar Rainbow. Una alícuota adicional se sometió a un tratamiento acido agregando μl de ácido HCl 1N en 450μl de la suspensión de perlas, rotando durante 1h antes de neutralizar con 475μl de E-buffer. Las suspensiones de perlas se sembraron en placas de Agar Rainbow sin diluir y con dilución 1:10 de las suspensiones tratadas con ácido. Todas las placas se incubaron a 35°C durante 20-24h. Las colonias presuntamente positivas se probaron mediante aglutinación de látex utilizando perlas de látex para STEC no O157 obtenidas de Abraxis LLC y para E.coli O157: H7, se confirmó utilizando el ensayo de PCR en tiempo real del Sistema Bax para E.coli O157: H7 o la suite STEC de PCR en tiempo real del Sistema Bax.
Se evidenció que de las 308 muestras 20 (6,5%) mostraron resultados positivos para los genes de la toxina Shiga, mientras que, el 28 (28%) muestras positivo para Salmonella. Se concluyó que E.coli O157:H7, los seis principales serogrupos STEC no O157 y Salmonella se detectaron en muestras de carne molida minorista utilizando los ensayos de PCR en tiempo real del Sistema Bax. El uso de mTSB con 2mg/L de novobiocina puede ser un medio adecuado para el enriquecimiento simultaneo de estos patógenos a partir de la misma muestra de carne picada; sin embargo, un segundo enriquecimiento en caldo RV y una placa en agar XLT-4 para las muestras que dan positivos en la detección de Salmonella facilitaría el aislamiento de las especies de Salmonella.
Por ello es importante que la industria y los laboratorios de análisis estén equipados con la tecnología más robusta para poder satisfacer las necesidades de inocuidad actuales. Si desea conocer más sobre el Sistema BAX de PCR, contáctese con nosotros para aprender más sobre el tema.
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